苏州纳微科技有限公司

资讯中心 / News

当前位置: 网站首页 -

液相色谱峰分叉了,怎么办?

浏览次数: 日期:2018-02-05 11:06:48

转自 色谱学堂

做液相色谱的同学基本都会碰到分叉峰,
很多时候
这都意味着硬件或者方法某些地方可能出现问题
今天我们就一起看看导致峰分叉的原因
以及如何解决这个问题
首先,我们需要判断
这到底是一个峰,还是两个峰?

A图主峰前面有一个肩峰
这到底是峰形不好
还是另外一个化合物没分开呢?


判断方法
降低该成分在样品中的浓度
B图是降低该成分浓度

如果这是一个峰
那肩峰也应该响应变小
但是这个例子里
肩峰没有变小
这应该是另外一个化合物
这时候,我们就要考虑如何改变方法
将这两个东西分开

 


如果所有峰的峰形都不好
一般来说
一个样品都会出多个峰
峰形不好,绝大多数时候
在每个峰上面都会出现
比如像下面这样:

A图是所有峰都拖尾.
B图是所有峰都有肩峰,
也可以说峰分叉
这种情况一般都是色谱柱头塌陷
或者柱头的筛板被堵导致的

为什么会导致峰形问题呢?

A图是正常的柱头
B图是筛板被堵的柱头
正常情况下
所有样品分子都是均匀通过色谱柱
形成一个对称的峰形
堵塞的情况下
有一部分样品分子进入色谱柱就会受到阻扰
导致时间拖后,形成拖尾
对于色谱柱塌陷的情况
用同样的方法大家也不难理解
只不过这时候
是一些样品分子可能跑的比正常的快了一些

 

如何解决这个问题呢?

01 反冲

柱出口放空,
冲20-30ml流动相。
虽然柱子上都有表明使用方向,
但是对于硅胶基质的色谱柱
基本都可以反冲。
将柱头污染物
如泵密封圈的碎屑,
样品中的污染等冲走,
就能解决问题。
当然,还是要提倡大家注意
样品上机之前的前处理
和及时更换磨损的泵密封圈。
有条件的还是用保护柱,
大不了就换保护柱,
也比换色谱柱强。

 

02 更换或清洗筛板

现在估计做这个事情的人不多,
但是谁有废柱子,
想练练也未尝不可。

我们一起看看一个实际的例子:

根据之前说的,
可能是柱头堵了,
或者塌陷了。
但是进一步检查,
发现另有原因。
方法用的150 mm 4.6 mm, 5 um C18 柱子,
78% 乙腈,1.5ml/min,等度方法,
进样10ul,100%乙腈溶解的样品。
一般来说,
虽然10ul的纯乙腈不会引起峰形不好,
但是有时候样品溶剂的极性跟流动相差异较大时,
的确会引起峰形的问题。

 

我们怎么办呢?

 

01
从最容易的办法做起,
降低溶剂乙腈的比例,
降到50%看看。
从下图B,4min的峰可以看出,
没啥改观。

02
接下来反冲柱子,
结果如图C,
基本没变化。
算了,明天再说吧。

03
第二天来到实验室,
还能干嘛呢?
更换筛板?
算了,直接换柱子吧!
结果如D,

噢,好很多噢。
之前柱子肯定有问题,扔了。
但是峰还是有点宽,
估计还是哪儿有问题。
手上忙,没时间管这个。

虽然到底什么原因导致之前峰形的问题,
已经无从查找
(柱子扔了,旧流动相也没了),
但是也给我们提供了一个解决问题的步骤:

 

1确定峰形问题
是所有峰都有问题,
还是就是某一个峰有问题。
如果所有峰都有问题,
基本都是色谱柱,
或者仪器管路连接的问题。
如果是某一个峰有问题,
那就要从方法上来考虑,
是否需要改变流动相比例,
pH值,色谱柱温度等等。

 

2 从最简单的做起
从不需要换什么东西的方法做起。
比如改变样品溶剂,
反冲色谱柱等等。

 

3 换东西
换保护柱,换色谱柱,
换流动相(新配),
一步一步的换,
有助于找到问题的根本。

 

4 总结经验
问题解决后,
想想需不需要采取什么措施,
防止类似问题的发生,
比如说常换流动相啦,
即时更换密封圈啦,
记录进样次数
了解什么时候色谱柱就不行了啊之类的。

 

所属类别: 行业资讯

该资讯的关键词为:

苏州纳微科技有限公司
在线客服