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层析装柱的注意事项

层析装柱的注意事项

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  • 发布时间:2017-04-06 00:00
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【概要描述】装柱前要仔细看填料的使用说明书,每种填料都有自己的特性,以及特殊的装柱方法,针对不同的空柱,也要注意方法可能不同。

层析装柱的注意事项

【概要描述】装柱前要仔细看填料的使用说明书,每种填料都有自己的特性,以及特殊的装柱方法,针对不同的空柱,也要注意方法可能不同。

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作者:Snail

 

 

装柱前要仔细看填料的使用说明书,每种填料都有自己的特性,以及特殊的装柱方法,针对不同的空柱,也要注意方法可能不同。

 

1、装柱前要仔细看填料的使用说明书,每种填料都有自己的特性,以及特殊的装柱方法,针对不同的空柱,也要注意方法可能不同;

 

2、填料要加水搅拌成均匀悬液,悬液浓度依填料而不同,一般70-85%,迅速倒入空柱内,或吸或压,流速和具体步骤看说明书。

 

3、这一点非常重要:装柱包括以后使用中绝对不允许柱内进入气泡(bubble free),柱头事先也要排除气泡。

 

4、选择合适的泵,首先是流速满足要求,脉冲尽量小。首选柱塞泵。

 

5、所有柱子尽量做到填料均匀,尤其是用于凝胶层析的柱子。装柱完成后,可用柱效测定的方法检查装填效果。一个装填合格的柱子的理论塔板高度应是填料平均粒径的2-4 倍,在此范围内越小越好。

 

6、准备上柱的液体应进行过滤,至少是0.45micrometre

 

7、至于测序,我想大概不到1mg 应该足够了。

 

8、关于纯化,首先要考虑的是你的目标:纯度、数量、速度、收率等等,再根据样品的具体情况,尤其是目标蛋白的性质,确定纯化策略。通常三步曲:capture、purification、polishing。第一步先从大量或复杂样品中将目标蛋白“抓出”,与主要杂质分离;再用高选择性的层析去除绝大部分杂质;最后精细纯化,提供纯度至设定目标。到实际工作中,不要死靠三步,也许一步也许四步或更多,具体情况具体分析。所谓“三步”只是一种思路而已。

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